热处理方法

\r (2)热处理法可延缓病毒的扩散速度并抑制病毒增殖,使果 树生长速度超过病毒的扩散速度,达到使正在生长的果树组织不含 病毒的目的,再将不含病毒的组织取下,培养成无病毒个体。处理 的温度和时间长短因植物和病毒种类而异。热处理要在适当的范围 内和适当的条件下进行,不能用过高的温度和过长的时间,以免使 植物致死。要掌握适宜的温度、光照和处理吋间,才能取得较好的 效果。热处理方法有两种:\r ①温汤浸溃将需脱毒材料浸入50?55°C的水中5?10分钟, 或在35°C的水中浸泡若干小时,使一些对热敏感的病毒钝化。\r ②高温空气处理该处理是在热处理箱内进行,需要对被病 毒侵染的整株苗木进行处理。具体方法是:将砧木种子种在花盆 中,实生苗长成后,将需处理的芽或枝条嫁接在砧木上,盆栽一年 后在早春移放到人工气候室或大型恒温箱中,装上日光灯,光照强 度3000?5000勒克斯,每天光照16小时,温度37?38°C,相对 湿度45%?90%。开始处理时温度为30?32°C,每隔一天上升\r ?C,直到37°C,稳定处理5?7周后,剪下新梢上1.5?2厘米长 I梢尖,微嫁接在健壮的无病毒砧木苗上。当年即可抽生新梢?下 ^再用指示植物法进行病毒鉴定,确认无病毒后,就可作为无病苺 J本树。\r 有时热处理不能脱除病毋,可用低温处理,使病职物不活化. 然后再切取茎尖进行组织培养,即可获得无锻苗。例如植株在5°C 下生长数个月,每日16小时的2500勒克斯光照,然后取茎尖 培养。\r (3)茎尖培养脱毒法作为脱漭所用的茎尖大小要适宜,茎尖 过大,接种容易成活,但脱琨效果差;茎尖过小,接种难成活,但 脱毒效果好。一般以0.1?0.2奄米,带有1?2片叶原越为好,超 过0.5毫米时,脱哿效果较差。\r 培养基只要能使茎尖生长迅速、分化快的均适于脱毐。苹果以 MS培养基较好,添加一定比例的细胞分裂素、生长索即可。\r 植物材料经过预处理,如热水或热空气处理、低温处理、药物(硫脲)处理等,使茎尖的病毒钝化或数1S减少,然后再切取茎尖 培养,均可提高脱课效率。一些病毒(尤其是类病毒)在一次茎尖 培养时不能有效地被脱除,还须经过多次反复的预处理和茎尖培养 才能有效果。\r 茎尖脱毒培养的条件同一般茎尖培养。\r 培养无病毒苗时,所用的土壤、花盆、用具及其他物品必须进 行消毒。短时间大i消璨时可用蒸汽。土壤高温消毒注意时间不要 太长,以免破坏其中的有机物,影响植物生长。\r (4)其他组织培养脱毒法包括原生质体培养、细胞培养、花 粉培养、胚培养、分生组织培养、顶端组织培养和愈伤组织培养 等,均可脱除病毒。一般是通过植物各部位器官和组织的培养去分 化,诱导产生愈伤组织;然后从愈伤组织再分化产生芽,长成小植 株,可得到无病镩苗。这说明病毒颗粒会在愈伤组织的培养过程中 逐渐消失。\r (5)茎尖微体嫁接脱萄法以当地优良砧木的种子作砧木。种 子经低温层积处理后,再消毒?,去种皮后将胚接种到含有MS无机 盐和0.7%琼脂的培养越上,在25°C黑暗条件下培养15天,去掉 上胚轴和子叶。去顶幼苗移至液体培养骓(含MS无机盐和3%蔗 糖)的平底试管中,内有一个滤纸桥,中间有小孔,砧木幼苗胚轴 穿过小孔使其固定。接穂品种可用试管培养的新梢,或从田间取无 菌茎尖作材料,以液体培养骓湿润接秘,然后与砧木胚轴的维管束 部位连接,1周后接锶部位产生愈伤组织,6周后接穂产生4?6片 叶时,就可往外移栽。\r 嫁接时茎尖大小为0. 2-0.3逯米,即带2?3个叶原基为好, 既可除去病诲,又有较高成活率。如从田间取材,嫁接适宜时期是 5月份,成活率70%;采用试管内的材料作接穗,则不论月份和季 节,成活率均可达到60%,最髙达90%以上。\r

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